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菌种的滤纸片保藏法

时间:2017-12-04 点击次数:2297

摘 要:

细菌菌种保藏是微生物学的一项基本实验技能。常用的菌种保藏方法较多,滤纸保藏法由于其较液氮法、冷冻干燥法等简便,不需要特殊设备,因此是比较常用的一种。滤纸保藏法包括抽真空法和无需抽真空法。当需要复苏使用菌种时,直接取出1-2片滤纸片放入适宜的培养基内培养即可。该法尤其适合一些对营养要求不高的细菌,保藏时间可达2年以上。

关键词: 冻干 , 培养基 , 菌种保藏 , 菌种复苏

在微生物实验中,细菌菌种保藏是一项基本的实验技能。常用的菌种保藏方法比较多,滤纸保藏法由于其较液氮法、冷冻干燥法等简便,也不需要特殊设备,因此是比较常用的一种。下面介绍用滤纸片法保藏菌种的方法。

一、滤纸片的准备

用打孔器将滤纸制成直径约3mm的圆形小纸片,放入普通玻璃小瓶中,121°C高压灭菌30分钟后备用。

二、菌种的准备

将需要保存的菌种,在适宜的斜面培养基或平板培养基上培养,使其充分生长。

三、菌种保存

(一)抽真空方法

(1)取灭菌脱脂牛乳1-2ml滴加在灭菌培养皿或试管内,挑取数环菌苔在牛乳内混匀,制成浓悬液。

(2)用灭菌镊子夹住高压灭菌后的滤纸片浸入菌悬液内,使其自然吸饱,小心放入灭菌后的菌种保存玻璃瓶内,每瓶至少放置10片,然后盖上瓶盖(注意留有小缝隙,不要盖紧)。

(3)在玻璃瓶外壁上注明菌种编号、种类、名称、保存时间等信息。

(4)将玻璃瓶放入内有五氧化二磷作吸水剂的干燥器中,用真空泵抽气至干(如果没有干燥器,也可直接抽气至干)。

(5)将干燥后的装有菌片的玻璃瓶放置于-20°C及以下低温冰箱冷冻保存。

上述滤纸片保存法需要抽真空,如果实验室不具备抽真空的条件,用如下方法。

(二)无需抽真空方法

(1)用无菌小镊子夹住滤纸片,每片在细菌平板上刮取菌苔,或至少刮取3-5个单菌落,然后将滤纸片放入菌种保存玻璃瓶内,每瓶至少放置10片,然后直接盖紧瓶盖。

(2)在玻璃瓶外壁上注明菌种编号、种类、名称、保存时间等信息。

(3)将干燥后的装有菌片的玻璃瓶放置于-20°C及以下低温冰箱冷冻保存。

四、菌种复苏

当需要复苏使用菌种时,从菌种保存玻璃瓶中取出1-2片滤纸片,用少量生理盐水浸泡后,划线接种于适宜的固体培养上;或直接将滤纸片放入适宜的液体培养基内,置培养箱中培养。

滤纸保藏法可应用于细菌、酵母菌、丝状真菌等的保藏,该法尤其适合一些对营养要求不高的菌种,保藏时间可达2年以上。滤纸保藏法可广泛应用于大、中、小等各类微生物实验室。

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